
核殼色譜柱與全多孔色譜柱相比,所具有的高柱效以及高分析效率可以從Van Deemter方程來進(jìn)行解釋。
核殼色譜柱的填料,一般是由內(nèi)部的實(shí)心球(其材質(zhì)以及形成方式與廠家有關(guān)、不同廠家,其技術(shù)存在不同)以及包裹在實(shí)心球上的多孔型硅膠或雜化顆粒型硅膠組成。
首先是核殼類色譜填料的內(nèi)核是實(shí)心球,導(dǎo)致該型填料具有更小的軸向擴(kuò)散效應(yīng),體現(xiàn)在Van Deemter方程上,主要影響第二項(xiàng)參數(shù)Dm,使得色譜峰軸向擴(kuò)展減小。
其次,由于實(shí)心球的存在,徑向上的溫度傳遞加快,使得溫度分布更加均一,加速傳質(zhì)速度;此外核殼類填料顆粒的傳質(zhì)路徑要比全多孔類填料短的多,使得傳質(zhì)速率與全多孔型填料相比更快。
最后也是最重要的,由于制備工藝的差異(核殼色譜柱填料的制備首先是制備實(shí)心球,之后在其表面“涂覆”全多孔硅膠;全多孔型色譜柱填料多是“一次性成型”),核殼色譜柱填料顆粒的粒徑分布相比全多孔色譜柱填料顆粒的粒徑分布更加均一、連續(xù)。體現(xiàn)在Van Deemter方程上,主要影響d一項(xiàng)參數(shù)dp,為渦流擴(kuò)散項(xiàng)。
填料的粒徑分布越均一,渦流擴(kuò)散項(xiàng)越小,對于理論塔板高度的貢獻(xiàn)也就越小,色譜柱的理論塔板數(shù)也就越多。渦流擴(kuò)散項(xiàng)是色譜峰柱內(nèi)擴(kuò)散的主要影響因素,模型圖3B比圖3A具有更加均一,連續(xù)的粒徑分布,因而具有更小的渦流擴(kuò)散效應(yīng),具有更高的柱效,表現(xiàn)在色譜圖上就是其峰寬更小,相鄰色譜峰的分離度更大。
核殼色譜柱的使用和維護(hù)注意事項(xiàng)
核殼色譜柱的正確使用和維護(hù)十分重要,稍有不慎就會降低柱效、縮短使用壽命甚至損壞。在色譜操作過程中,需要注意下列問題,以維護(hù)核殼色譜柱。
①避免壓力和溫度的急劇變化及任何機(jī)械震動。溫度的突然變化或者使核殼色譜柱從高處掉下都會影響柱內(nèi)的填充狀況;柱壓的突然升高或降低也會沖動柱內(nèi)填料,因此在調(diào)節(jié)流速時(shí)應(yīng)該緩慢進(jìn)行,在閥進(jìn)樣時(shí)閥的轉(zhuǎn)動不能過緩。
②應(yīng)逐漸改變?nèi)軇┑慕M成,特別是反相色譜中,不應(yīng)直接從有機(jī)溶劑改變?yōu)槿渴撬?,反之亦然?/p>
?、垡话阏f來核殼色譜柱不能反沖,只有生產(chǎn)者指明該柱可以反沖時(shí),才可以反沖除去留在柱頭的雜質(zhì)。否則反沖會迅速降低柱效。
?、苓x擇使用適宜的流動相,以避免固定相被破壞。有時(shí)可以在進(jìn)樣器前面連接一預(yù)柱,分析柱是鍵合硅膠時(shí),預(yù)柱為硅膠,可使流動相在進(jìn)入分析柱之前預(yù)先被硅膠“飽和”,避免分析柱中的硅膠基質(zhì)被溶解。
?、荼苊鈱⒒|(zhì)復(fù)雜的樣品尤其是生物樣品直接注入柱內(nèi),需要對樣品進(jìn)行預(yù)處理或者在進(jìn)樣器和核殼色譜柱之間連接一保護(hù)柱。保護(hù)柱一般是填有相似固定相的短柱。保護(hù)柱可以而且應(yīng)該經(jīng)常更換。
?、藿?jīng)常用強(qiáng)溶劑沖洗核殼色譜柱,清除保留在柱內(nèi)的雜質(zhì)。在進(jìn)行清洗時(shí),對流路系統(tǒng)中流動相的置換應(yīng)以相混溶的溶劑逐漸過渡,每種流動相的體積應(yīng)是柱體積的20倍左右,即常規(guī)分析需要50~75ml。
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